|
|
|
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
![]() |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Заболеваемость пироплазмозом и изменение гематологических показателей собак в зависимости от породной принадлежностиУДК 619:612.118.2:616.993.192.6:636.7 Оригинальное эмпирическое исследование Орлова С.Е., Жигилева О.Н. Федеральное государственное автономное образовательное учреждение Аннотация. Пироплазмоз представляет серьёзную угрозу для здоровья животных, приводя в тяжёлых случаях к летальному исходу. Частота встречаемости пироплазмоза в г. Тюмени в период с 2018 по 2024 гг. составила в среднем 1,5-6%, повышаясь в отдельные сезоны до 19% от числа обратившихся в клинику собак. Заболеваемость пироплазмозом не зависела от пола, возраста и степени породистости собаки. Наблюдалась тенденция к большему числу заболеваний породистых собак, среди которых пироплазмоз статистически чаще встречался у ретриверов, спаниелей и водных собак и реже – у терьеров. Цель исследования: изучить изменение гематологических показателей в зависимости от породной принадлежности собак при заболевании пироплазмозом. Материалы и методы исследований. В исследовании показателей крови участвовало 130 собак с диагностированным пироплазмозом и 100 условно здоровых собак. Результаты исследований и их обсуждение. Выявлено, что степень выраженности изменений клинической картины крови при пироплазмозе различна в группах породистых, беспородных собак и метисов. У беспородных собак анемия и воспалительные процессы выражены сильнее. У метисов менее выражены анемия и воспалительные процессы, и сильнее – тромбоцитопения, статистически значимо повышаются моноциты. У породистых собак при пироплазмозе помимо типичных изменений картины крови, также снижается средний объём тромбоцитов. У метисов заболевание протекает в более лёгкой форме по сравнению с породистыми и беспородными собаками. Полученные данные могут помочь при диагностике и в индивидуализации лечения собак при пироплазмозе. Заключение. При пироплазмозе у собак регистрировались выраженная тромбоцитопения и эритроцитопения. Уменьшались показатели гемоглобина, гематокрита, а также средняя концентрация гемоглобина в эритроците. Скорость оседания эритроцитов у собак, больных пироплазмозом, увеличивается, что свидетельствует о наличии воспаления в организме, но уровень лейкоцитов при этом не повышается. Ключевые слова: пироплазмоз, Babesia, домашние собаки, породы, метисы, гематологические показатели, анемия, тромбоцитопения, лейкоцитарная формула, СОЭ. Пироплазмоз (бабезиоз) – природно-очаговое трансмиссивное заболевание, которое носит сезонный характер [1]. По данным геносистематики, возбудителями заболевания являются как минимум три вида одноклеточных кровепаразитов рода Babesia, переносчиками которых являются разные виды иксодовых клещей [2]. Пироплазмоз занимает особое место в ветеринарной практике, так как частота встречаемости данного заболевания значительна и растёт с каждым годом. На сегодняшний день заболевание собак пироплазмозом распространено в пределах всей страны и является одной из наиболее серьёзных проблем в ветеринарии. Пироплазмоз регистрируется у 14-18% от общего количества собак, обратившихся в ветеринарные клиники. Заболеваемость собак в разных регионах Российской Федерации колеблется от 12 до 75% [3, 4, 5]. На территории юга Тюменской области пироплазмоз также имеет широкое распространение. Согласно исследованиям Л.Н. Скосырских и О.А. Столбовой [6], в весенне-осенний период средняя зараженность собак составила 31,6%. При этом количество случаев заболевания коррелирует с количеством клещей на данной территории [7]. Пироплазмоз представляет серьёзную угрозу для здоровья животных, поскольку с течением заболевания развиваются гемолитическая анемия, лихорадка, гемоглобинурия, почечная недостаточность, и в тяжёлых случаях это приводит к летальному исходу. Одним из главных критериев диагностики заболевания и оценки тяжести его течения является изменение гематологических показателей. Типичные нарушения при пироплазмозе – это анемия, тромбоцитопения и лейкоцитоз. В биохимическом анализе крови заражённых собак ключевым признаком наличия заболевания может быть повышенное содержание мочевины. При избыточном гемоглобине в плазме возрастает нагрузка на печень, из-за чего повышается содержание билирубина. Также наблюдается аномальное повышение показателя АСТ, при этом показатель АЛТ повышается не настолько резко – в 2,3-2,4 раза по сравнению с физиологической нормой [8]. Степень выраженности нарушений, тяжесть заболевания и скорость прогрессирования могут быть связаны с породной принадлежностью собак [9]. Изучение взаимосвязи между породной принадлежностью и изменением гематологических показателей поможет повысить точность диагностики заболевания, поскольку у разных пород собак могут различаться нормы гематологических показателей. Помимо этого, изучение изменений гематологических показателей может помочь в индивидуализации лечения, так как тяжесть заболевания и скорость его развития могут различаться в зависимости от породной принадлежности. Цель исследования – изучение изменения гематологических показателей собак при пироплазмозе в зависимости от породной принадлежности. Материал и методы исследований. Исследования проведены на базе ветеринарной клиники ООО «ВетКом» г. Тюмени в период 2018-2024 гг. Проанализированы гематологические показатели 130 собак с диагностированным пироплазмозом и 100 условно здоровых собак, использованных в качестве контрольных. Собаки были разбиты на группы: породистые, метисы, беспородные (таблица 1). Таблица 1 Распределение собак по группам среди условно здоровых (контроль) и больных пироплазмозом (опыт)
Среди исследуемых собак представлены породистые собаки 6 групп по классификации кинологических организаций (https:// fci.be/en/): пастушьи и скотогонные собаки, кроме швейцарских скотогонных собак; пинчеры и шнауцеры, молоссы, горные и швейцарские скотогонные собаки; терьеры; шпицы и породы примитивного типа; ретриверы, спаниели и водяные собаки; декоративные и собаки-компаньоны. Возрастной диапазон исследуемых собак составил от 3 месяцев до 16 лет. Доля самцов и самок в контрольной выборке составила 64 и 36%, в опытной – 62 и 38%, соответственно. Для диагностики пироплазмоза собак использовали прямой метод – микроскопии мазков крови. Общий анализ крови (ОАК) включал в себя 16 гематологических показателей, определение лейкоформулы и скорости оседания эритроцитов (СОЭ). На гематологическом анализаторе VetScan HM5 (Abaxis, США), с использованием пакета реактивов VetScan HM5 (PN770-9000) определяли 15 показателей: WBC (лейкоциты), LYM% (% лимфоцитов), MON% (% моноцитов), NEU% (% нейтрофилов), EOS% (% эозинофилов), BAS% (% базофилов), HGB (гемоглобин), RBC (эритроциты), HCT (гематокрит), MCV (средний объём эритроцитов), RDWс (ширина распределения эритроцитов по объёму), MCH (среднее содержание гемоглобина в эритроците), MCHC (средняя концентрация гемоглобина в эритроците), PLT (тромбоциты), MPV (средний объём эритроцитов). Для подсчёта лейкоцитов делали мазок венозной крови, который окрашивали набором реагентов для быстрого дифференцированного окрашивания биопрепаратов «ДИАХИМ-ДИФФ-КВИК», согласно инструкции. Статистическую обработку данных делали в среде программирования Colab с помощью библиотек scipy.stats и pandas, а также в программе MS Excel. Рассчитывали среднее значение каждого показателя, стандартную ошибку среднего, коэффициент вариации, статистическую значимость различий. Результаты исследований и их обсуждение. В период с 2018 по 2024 гг. средние показатели заболеваемости пироплазмозом, относительно всех собак, обратившихся в клинику, варьировали в пределах 1,5-6%, повышаясь в отдельные сезоны до 19% (табл. 2). Таблица 2 Доля положительных реакций на пироплазмоз среди обратившихся в клинику собак (%)
Сезонность заболевания существенно варьировала в разные годы. Динамика заболевания за период 2018-2022 годов имела нетипичную картину для пироплазмоза за счёт вспышки в июле 2022 года и отсутствия заболевания в сентябре и октябре 2020 и 2021 годов. В 2018 году наибольшее число заболеваний отмечено в сентябре. В 2020 и 2021 годах период заболевания пришёлся на апрель – август, что соответствует весенней (апрель – начало июня) и началу осенней (август – октябрь) вспышек. В 2020 году наибольшее число заболеваний пришлось на апрель и июнь, в 2021 году вспышка пироплазмоза была в мае. В 2022 году наибольший процент заболевших отмечен в июле, что не характерно для пироплазмоза. В 2022 году Роспотребнадзором по Тюменской области была зарегистрирована вспышка массового размножения клещей (https://72.rospotrebnadzor.ru/ content/492/112586/). В 2023 и 2024 годах динамика пироплазмоза была типичной, имея осеннюю и весеннюю вспышки и небольшое затухание в июле. В 2024 году период заболевания был особенно длинный – с марта по октябрь. Распределение собак по группам среди условно здоровых (контроль) и больных пироплазмозом (опыт) достоверно не различалось. Наблюдается тенденция к большему числу породистых собак в группе больных пироплазмозом – 58% против 49% в контрольной группе. Меньше всего в процентном отношении среди заболевших собак составляют метисы – 20%, в контрольной выборке их доля равна 28%. Доля беспородных собак была одинакова (рисунок 1). Полученные результаты согласуются с данными Д. Ю. Акимова с соавт. [10] об отсутствии породной предрасположенности к пироплазмозу.
Рис. 1. Распределение собак по группам (контроль) и больных пироплазмозом (опыт), % среди условно здоровых Породистые собаки были разделены на породные группы согласно классификации кинологических организаций (https://fci. be/en/). Статистически значимо чаще среди больных пироплазмозом встречались ретриверы, спаниели и водяные собаки и реже – терьеры (р<0,05). Кроме того, выявлена тенденция к увеличению числа заболевших собак среди группы (5) шпицы и породы примитивного типа, их доля составляет 25,3% (19 особей). В группе представлены такие породы, как хаски, акита ину, сиба ину, чау-чау, шпиц и кеесхонд. На втором месте по числу заболевших находятся группы: (1) пастушьи и скотогонные собаки, кроме швейцарских скотогонных собак; (2) пинчеры и шнауцеры, молоссы, горные и швейцарские скотогонные собаки; (3) терьеры, соответственно. Их доля составляет 16% (по 12 особей). Данные группы представлены породами: немецкая овчарка, корги, пинчер, кавказская овчарка, канне корсо, алабай, ротвейлер, джек рассел терьер и йоркширский терьер. Наименьший процент заболеваемости выявлен в группе (9) декоративные и собаки-компаньоны – 12% (9 особей). Группы 4, 6, 7 и 10 в выборке отсутствовали (рисунок 2).
Рис. 2. Распределение собак среди условно здоровых (контроль) и больных пироплазмозом (опыт) по породным группам: 1 – пастушьи и скотогонные собаки, кроме швейцарских скотогонных собак; 2 – пинчеры и шнауцеры, молоссы, горные и швейцарские скотогонные собаки; 3 – терьеры; 4 – шпицы и породы примитивного типа; 5 – ретриверы, спаниели и водяные собаки; 6 – декоративные и собаки-компаньоны; * – статистически достоверные различия с контролем (р<0,05) Д. С. Толмачева и А. Н. Сибен [11] объясняют высокий процент заражения в 1 и 2 группах тем, что в их состав входят охотничьи и сторожевые собаки, которые чаще бывают на открытой местности (охота, частный сектор), и вероятность контакта с клещами у таких собак выше. Самый высокий процент заражения в группе 5 можно объяснить тем, что среди них высока доля северных ездовых собак (9,3%), которые характеризуются активным образом жизни и много времени проводят на открытой местности. В наших исследованиях не выявлено различий по частоте встречаемости пироплазмоза у собак разного пола. Распределение по возрасту в опытной и контрольной группах было сходным, с преобладанием молодых животных (до 4 лет) (рисунок 3).
Рис. 3. Распределение собак по возрастным группам среди условно здоровых (контроль) и больных пироплазмозом (опыт), % Поскольку не выявлено статистически значимых различий в распределении собак по полу и возрасту между опытной и контрольной группами, гематологические параметры анализировали безотносительно этих данных. Средние значения концентрации лейкоцитов (WBC) контрольной и опытной групп входят в референсный диапазон. Однако у собак с пироплазмозом наблюдается снижение среднего значения по сравнению с контрольной группой (р<0,05). Сильнее всего концентрация лейкоцитов снизилась у беспородных собак – почти в 2 раза по сравнению с контрольной группой, меньше всего – у метисов. Таким образом, при пироплазмозе количество лейкоцитов снижается, но остаётся в пределах нормы. При этом увеличивается разброс значений этого параметра, особенно выраженный в группе породистых собак (табл. 3). Таблица 3 Концентрация лейкоцитов (WBC) в крови больных пироплазмозом и условно здоровых собак, 109/l
Примечание: статистически достоверные различия по сравнению с контролем * – р<0,05; *** – р<0,001; референсный диапазон 6,0- 17,0×109/l. Средняя концентрация эритроцитов (RBC) у собак, больных пироплазмозом, была ниже нормы и статистически значимо ниже контроля во всех трех группах. Снижение концентрации эритроцитов свидетельствует о начинающейся анемии. По сравнению с контрольными выборками, среднее значение сильнее всего снизилось у породистых собак. В сравнении с референсным диапазоном, сильнее понижена концентрация эритроцитов у беспородных собак (табл. 4). Таблица 4 Концентрация эритроцитов (RBC) в крови больных пироплазмозом и условно здоровых собак, 1012/l
Примечание: статистически достоверные различия по сравнению с контролем ** – р<0,01; *** – р<0,001; референсный диапазон 5,5-8,5×1012/l. У всех собак, больных пироплазмозом, наблюдается снижение содержания гемоглобина. Однако у метисов показатель хоть и понизился, но остался в пределах референсного диапазона (табл. 5). У беспородных собак с подтвердившимся пироплазмозом среднее значение гематокрита ниже нормы и отличается от среднего значения контрольной группы на 10%. Среднее значение гематокрита у породистых собак находится в референсном диапазоне, но понижено в сравнении с контрольной группой. Среднее значение НСТ опытной группы метисов находится на нижней границе референсного диапазона и статистически значимо меньше, чем в контроле. У данной группы высокий коэффициент вариации, что говорит о неоднородности выборки. У беспородных собак и метисов прослеживается корреляция между понижением концентрации эритроцитов и гематокрита. У породистых собак несмотря на то, что концентрация эритроцитов вышла за пределы референсного диапазона, гематокрит понизился не так сильно и остался в норме (табл. 6). Таблица 5 Гемоглобин (HGB) в крови больных пироплазмозом и условно здоровых собак, g/l
Примечание: статистически достоверные различия по сравнению с контролем * – р<0,05; *** – р<0,001; референсный диапазон 12,0-18,0 g/l. Таблица 6 Гематокрит (НСТ) в крови больных пироплазмозом и условно здоровых собак, %
Примечание: статистически достоверные различия по сравнению с контролем * – р<0,05; ** – р<0,01; референсный диапазон 37-55%. Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC) у собак с подтверждённым пироплазмозом была ниже нормы и показателей условно здоровых собак (табл. 7). Таблица 7 Средняя концентрация гемоглобина в эритроците (MCHC) в крови больных пироплазмозом и условно здоровых собак, g/l
Примечание: статистически достоверные различия по сравнению с контролем * – р<0,05; *** – р<0,001; референсный диапазон 31,0-39,0 g/l. Средний объём эритроцитов (MCV) и среднее содержание гемоглобина в эритроците (MCH) больных пироплазмозом и условно здоровых собак разных породных групп не выходили за пределы референсного диапазона и статистически значимо не отличались от контроля. Достоверных различий между средними значениями ширины распределения эритроцитов (RDWс) в контрольной и опытной группах не выявлено, отмечена тенденция к незначительному понижению значений показателя RDWс у собак с диагностированным пироплазмозом, по сравнению с контрольными группами. Одним из главных показателей общего анализа крови для диагностики пироплазмоза является количество тромбоцитов (PLT). Средние значения данного показателя в опытной группе ниже референсного значения и в 10 раз ниже показателя контрольной группы. Среди больных собак наиболее сильно отличается среднее значение показателя от референсного диапазона у метисов, при сравнении с контрольной группой самые значительные изменения наблюдаются у беспородных собак (табл. 8). Таблица 8 Тромбоциты (PLT) в крови больных пироплазмозом и условно здоровых собак, 109/l
Примечание: статистически достоверные различия по сравнению с контролем *** – р<0,001; референсный диапазон 165-500×109/l. У собак с пироплазмозом наблюдается выраженная тромбоцитопения. Такие показатели можно объяснить снижением образования в красном костном мозге, повышенным разрушением тромбоцитов и их перераспределением [12]. Помимо абсолютного числа тромбоцитов измерялся и их средний объём (MPV). Средние значения данного показателя контрольных и опытных собак были в пределах нормы, но достоверно различались среди породистых собак (табл. 9). Различия между средними показателями СОЭ контрольных и опытных групп статистически достоверны (табл. 10). Значения показателей СОЭ у собак всех групп, кроме условно здоровых породистых собак, повышены. Также стоит отметить, что в опытных группах значения показателей выше, чем у условно здоровых собак. Повышение значений можно объяснить имеющимся в организме воспалением [13]. Таблица 9 Средний объём тромбоцитов (MPV) в крови больных пироплазмозом и условно здоровых собак, fl
Примечание: статистически достоверные различия по сравнению с контролем * – р<0,05; ** – р<0,01; референсный диапазон 3,9-11,1 fl. Таблица 10 Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) в крови больных пироплазмозом и условно здоровых собак, мм/ч
Примечание: статистически достоверные различия по сравнению с контролем * – р<0,05; референсный диапазон 2-6 мм/ч. При анализе лейкоцитарной формулы выяснено, что изменения в системе белой крови при пироплазмозе не столь значительны. Различия между средними значениями нейтрофилов, эозинофилов, базофилов и лимфоцитов статистически не значимы и находятся в пределах референсного диапазона у всех изученных групп собак. Однако у собак с диагностированным пироплазмозом среднее значение доли моноцитов превышает верхнюю границу референсного диапазона. Кроме того, у больных пироплазмозом метисов выявлено статистически значимое повышение доли моноцитов по сравнению с контролем (табл. 11). Таблица 11 Моноциты в крови больных пироплазмозом и условно здоровых собак, %
Примечание: статистически достоверные различия по сравнению с контролем * – р<0,05; ** – р<0,01; референсный диапазон 1-4%. Заключение. Таким образом, при пироплазмозе у собак наблюдается ярко выраженная тромбоцитопения, которая является одним из главных показателей для диагностирования заболевания. Помимо этого, количество эритроцитов снижено, что свидетельствует о начинающейся анемии. Вместе с эритроцитами снижаются и значения гемоглобина, гематокрита, а также средняя концентрация гемоглобина в эритроците. Скорость оседания эритроцитов у собак, больных пироплазмозом, увеличивается, что свидетельствует о наличии воспаления в организме, но уровень лейкоцитов при этом не повышается. Можно заметить, что такие показатели, как RBC, MCHC и СОЭ подвергаются наименьшему изменению в группе метисов. У метисов с диагностированным пироплазмозом гемоглобин остаётся в норме, в отличие от остальных групп собак. Также именно в этой группе повышается среднее значение количества моноцитов, которые принимают участие в иммунном ответе. Это может свидетельствовать о том, что в данной группе заболевание протекает в более лёгкой форме. У беспородных собак изменения значений показателей WBC, RBC, HGB, HCT, MCHC и СОЭ более выражены, чем у метисов и породистых собак, что может свидетельствовать о более тяжёлом течении болезни. Список литературы: 1. Карташов С. И. [и др.]. Бабезиоз собак: новые экологические, молекулярно-генетические и клинико-лабораторные аспекты. Ветеринария Кубани. 2010; (5): 28-32. 2. Irwin P.J. Canine babesiosis: from molecular taxonomy to control. Parasites Vectors. 2009; 2 (Suppl 1): S4. 3. Заиченко И. В., Заиченко В. И., Оробец В. А. Бабезиоз собак на территории города Пятигорска. Российский паразитологический журнал. 2010; (3): 64-66. 4. Никулина О. Ю. Бабезиоз собак в Рязанской области: распространение, особенности эпизоотологии, лечение. 2016: 22 с. 5. Пономарев Н. М., Новикова М. Ю., Тихая Н. В. Особенности эпизоотологии и биохимические показатели собак при бабезиозе в г. Барнауле. Российский паразитологический журнал. 2020; 14 (2): 46-52. 6. Столбова О. А., Скосырских Л. Н. Пироплазмоз собак в условиях г. Тюмень. АгроЭкоИнфо. 2018; (3 (33): 42. 7. Домацкий В. Н. Распространение бабезиоза собак в Российской Федерации (обзор). Вестник КрасГАУ. 2022; (10 (187): 100-108. 8. Тузова И. И., Панкрушина А. Н., Горшкова Н. О. Изучение биохимических показателей крови собак при пироплазмозе. Вестник Тверского государственного университета. Серия «Биология и экология». 2024; (1 (73): 45-53. 9. Веселова Н. Я. Патогенез пироплазмоза собак. 1993: 137 с. 10. Акимов Д. Ю. [и др.]. Некоторые аспекты эпизоотологии пироплазмоза собак в городе Ульяновске. Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения. Материалы VI Международной научно-практической конференции. Ульяновская ГСХА. 2015: 3-5. 11. Толмачева Д. С., Сибен А. Н. Особенности протекания пироплазмоза у собак г. Тюмень. Вестник Тюменского государственного университета. Экология и природопользование. 2017; 3 (2): 140-154. 12. Червяков Д. Э. Изменения в физиологическом составе крови у собак при бабезиозе. Вестник ОрелГАУ. 2018; (4 (73): 120-123. 13. Шамсутдинова Н. В., Родионов А. П. Морфологические и биохимические показатели крови собак, больных пироплазмозом. Ветеринарный врач. 2017; (3): 61-66. Сведения об авторах: Орлова Светлана Евгеньевна, специалист ФГАОУ ВО «Тюменский государственный университет»; 625003, г. Тюмень, ул. Володарского, 6; тел.: 8-3452-597400 (доб. 16622); e-mail: svetikorlik.@mail.ru. Ответственный за переписку с редакцией: Жигилева Оксана Николаевна, доктор биологических наук, профессор кафедры экологии и генетики ФГАОУ ВО «Тюменский государственный университет»; 625003, г. Тюмень, ул. Володарского, 6; тел.: 8-3452-597400 (доб. 16622); e-mail: zhigileva@mail.ru. Заявленный вклад авторов: Орлова С. Е.: проведение исследований, формальный анализ, валидация результатов, визуализация, написание черновика рукописи. Жигилева О. Н.: научное руководство, разработка концепции, валидация результатов, визуализация, написание рукописи – рецензирование и редактирование. Конфликт интересов: авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||