rus eng
Архив номеров / Номер 1, 2023 год Распечатать

Изучение влияния ассоциативного проявления Cheyletiella spp. и Trichodectes spp. на цитологические показатели лабораторных животных с учетом инокуляционной особенности

УДК 619:576.895.2:616-093/-098
DOI 10.33861/2071-8020-2023-1-26-28

Марченко А.П., Миронова А.А., Миронова Л.П., Фетисов Л.Н. Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский
ветеринарный институт - филиал ФГБНУ «Федеральный Ростовский аграрный научный центр», Ростовская область,
г. Новочеркасск

По статистике ряда ветеринарных ресурсов частым клиническим случаем (более чем в 19,4%) является диагностирование дерматитов кожных покровов животных различной этиологии. Первопричиной может явиться как инфекционный, так и неинфекционный агент, за который нередко принимается: бактериальная, вирусная, паразитарная, аллергенная и иммунная природа патологического процесса поражения кожных покровов животных, в том числе грызунов [1, 10].

Исследование влияния данных групп болезней на организм является не только актуальной задачей, требующей компетентной оценки специалиста, но и методом совершенствования знаний в области паразитологии, использования инновационных способов лечения, применимых конкретно в арахноэнтомологии, изучения принципов развития возбудителя, контроля заболеваемости на всех этапах его взаимодействия с организмом хозяина.

На сегодняшний день проблема изучения ассоциативного проявления паразитарного осложненного дерматита животных выделяется как отдельная группа патологий, причиной которых являются арахнозы (клещи) и энтомозы (насекомые). Общая особенность данных организмов это - характерный цикл развития, представленный метаморфозом, то есть превращением личинок во взрослую половозрелую имагинальную стадию членистоногого. К данной группе возбудителей болезней мелких домашних животных относится следующий видовой состав членистоногих: Trichodectes spp., Notoedres spp., Demodex spp., Sarcoptes spp., Cheyletiella spp., Ctenocephalides spp. и другие.

При этом отдельно рассматривается их способность к иноку-ляторному, трофическому, токсическому, и даже иммунному воздействию, так как изучение комплексного влияния способствует наиболее глубокому формированию знаний о данных организмах и их особенностей взаимодействия с организмом дефинитивного хозяина [2].

Собственно понятие иммунная система животных включает сложно-структурный комплекс оказывающий ответ, на чужеродный агент, попавший в организм. Данная система сложно организована, и состоит из нескольких неразрывно взаимосвязанных комплексов, отвечающих за подавление патологического процесса, где выделяется ретикуло-эндотелиальный аппарат, тимус, селезенка, печень и другие органные структуры. Отдельного внимания заслуживает детальное изучение жидкой ткани организма - крови. Причиной того является многофункциональность и участие ее в формировании первичного иммунного ответа на возбудителя заболевания. Видовое разнообразие твердой фракции крови определяется наличием многообразия клеточных форм, таких как лейкоциты, эритроциты, лимфоциты, тромбоциты, базофилы и эозинофилы. Количественное изменение их в цитологическом препарате первостепенно сигнализирует о возникновении патологического процесса, вызванного, в том числе и членистоногими [3, 5]. Отсюда, проблема изучения воздействия арахнозов, энтомозов (в особенности при ассоциативном их проявлении) на клеточный иммунитет кожных покровов организма, что является немаловажным критерием при постановке диагноза и осуществлении терапевтического лечения животных, в том числе грызунов и других мелких и декоративных животных [4].

Целью работы стало определение влияния ассоциативного течения арахнозов и энтомозов (на примере Cheyletiella spp., Trichodectes spp.) на цитологические критерии с учетом степени инвазированно-сти животных. Достижение цели осуществлялось последовательным выполнением ряда задач по проведению диагностических мероприятий для обнаружения возбудителей арахноэнтомологических болезней, осуществлению цитологических исследований пораженных участков кожных покровов и изучению видового разнообразия микроорганизмов, полученных при их культивировании.

Материалы и методы исследований. В процессе проведения исследования изучению подверглись лабораторные животные разных видов и возрастных групп: мышь альбинос (Mus albus officinarum), кролик европейский (Oryctolagus-cuniculus), крыса лабораторная (Rattus norvegicus domestica).

Идентификация возбудителей арахноэнтомозов лабораторных животных осуществлялась методом фиксирования имагинальных, нимфальных, телеонимфальных и других стадий с помощью метода соскоба материала с кожных покровов и сбором шерстного покрова животных. Дифференциация паразитов проводилась согласно их строению и внешним признакам при детальном изучении препарата под увеличением оптических приборов [6].

Осуществление цитологического исследования пораженных участков, места локализации возбудителей образованные на фоне множественных укусов насекомых и расчесов животных подвергались изучению по следующему методу [9]: с пораженного участка стерильным одноразовым лезвием соскабливается верхний слой кожи до получения небольшой экссудации пораженного слоя эпидермиса, с последующей фиксацией полученного выпота на лабораторном стекле, формируя, тем самым, небольшой отпечаток. После чего полученный препарат тщательно просушивается и окрашивается по Паппенгейму с использованием красителя Май-Грюнвальда и Романовского-Гимза. Полученный материал оценивается по характеру бактериальных клеток, морфологическому разнообразию форменных элементов и другим изменениям.

Процесс осуществления исследования видового разнообразия бактерий и собственно вторичную причину воспалительной реакции, выполнялся после предварительного подготовительного этапа заключающегося в сборе патологического материала стерильной ватной палочкой, помещаемой в физиологический раствор.

Посев материала, производился на питательные среды: желточно-солевой агар, кровяной агар, маннит-солевой агар с последующей инкубацией материала в температурном режиме равном 37-380С в течение 24-48 часов [7].

Таблица 1 Результат цитологических исследований кожного соскоба зараженных энтомозами животных в исследуемом биопрепарате (400х)

Видовая принадлежность мелких домашних и декоративных животных

Тучные клетки

Нити хроматина

Нейтро­фильные клетки

Корнеациты, кератинациты

Эритро­цитарные клеточные структуры

Показатель лимфоцитов

Клинически здоровые животные

Мышь альбинос (Mus albus officinarum)

-

-

1±0,25

1,3±0,1

5±0,52

7±1,4

Кролик европейский (Oryctolagus cuniculus)

1±0,4

-

2±0,8

2,1±0,8

4±1,6

5±0,1

Крыса лабораторная (Rattus norvegicus domestica)

-

-

1±0,25

1±0,01

9±2,4

6±0,3

Животные, инвазированные иммагинальной и нимфальной стадией Cheyletidae spp., Trichodectes spp.

Мышь альбинос (Mus albus officinarum)

11±5,4**

13±5,6**

4±1,6*

5±1,1*

22±1,4*

6±0,08

Кролик Европейский (Oryctolagus cuniculus)

9±3,9*

18±9,6**

8±3,9*

6±2,8*

21±10,3*

9,1±3,9

Крыса лабораторная (Rattus norvegicus domestica)

7±3,7*

16±5,7**

7±0,4*

2,5±0,7

25±15,7*

5,5±0,32

Примечание: ** - р < 0,02; *- р < 0,05

Идентификация полученных микроорганизмов производилась с применением тест-систем Microgen Strep-ID, Bacillus-ID Staph-ID, включающих палитру-картридж, содержащий 15 различных биохимических соединений. На основании положительной или отрицательной ферментации каждой лунки производилось определение вида бактериальной клетки [8].

Результаты исследований и их обсуждение. Цитологические показатели при исследовании кожного соскоба зараженных Cheyletiella spp., Trichodectes spp. животных, проявили ряд отклонений, среди которых: наличие тучных клеток, нитей хроматина, нейтрофилов, лимфоцитов, эритроцитов (табл. 1).

Помимо этого, отмечалось, что при исследовании животных вида Rattus norvegicus domestica - различие исследуемых показателей в значительной степени превосходило таковые у клинически здоровых животных. Отличие данных показателей при их определении составило по содержанию: тучных клеток 8±3,5; нитей хроматина 18±6,6; нейтрофилов 6±3,1; присутствию свободных корнеацитов и кератиноцитов 4,8±2,8; эритроцитарных клеточных структур 17±8,7, соответственно.

Таблица 2 Результат определения видового разнообразия бактерий кожных покровов животных

Видовое разнообразие полученных микроорганиз­мов

Животные, контамини­рованные выделенны­ми микроорганизмами

Идентифика­ция с исполь­зованием диагностиче­ского набора (Microgen-ID)

Количество выделенных микроорга­низмов, КОЕ/г (1x107)

Bacillus cereus

Rattus norvegicus domestica; Oryctolagus-cuniculus; Mus albus officinarum

+

0,2 ± 0,07

Staphylococcus aureus

Rattus norvegicus domestica; Oryctolagus-cuniculus; Mus albus officinarum

+

0,8 ± 0,5

Staphylococcus epidermidis

Oryctolagus-cuniculus

+

0,4 ± 0,08

Streptococcus pyogenes

Rattus norvegicus domestica; Oryctolagus-cuniculus

+

0,5 ± 0,36

Streptococcus intermedius

Rattus norvegicus domestica; Oryctolagus-cuniculus; Mus albus officinarum

+

1,3 ± 0,5

При осуществлении микробиологического исследования кожного соскоба у лабораторных животных, результаты которого отражены в таблице 2, выявленное видовое разнообразие микрофлоры было представлено бактериями Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes и Streptococcus intermedius.

Сравнением численных показателей микроорганизмов, полученных в результате бактериологического исследования кожной экссудации, отмечалось высокое значение выделенных бактериальных форм вида Streptococcus intermedius - 1,3±0,05, Staphylococcus aureus - 0,8±0,05, Streptococcus pyogenes - 0,5±0,36, обнаруженных у каждого исследуемого вида лабораторных животных.

Заключение. Нами установлено, что цитологический метод исследования кожного соскоба является одним из универсальных методов определения цитоморфологической картины при патологическом процессе, вызванном ассоциативным проявлением заболевания арахноэнтомозами, возбудителями которых являются Cheyletiella spp. и Trichodectes spp. В ходе опыта выявлено, что по составу клеток крови у животных, зараженных данными арахноэн-томозами, определяется значительное наличие тучных клеток, нитей хроматина, нейтрофилов, лимфоцитов, эритроцитов. По результатам исследований нами установлено, что наибольшей восприимчивостью к данному заболеванию обладает крыса лабораторная (Rattus norvegicus domestica) - различие исследуемых показателей в опытных группах превосходило показатель клинически здоровых животных по содержанию тучных клеток на 8±3,5; нитей хроматина 18±6,6; нейтрофилов 6±3,1; присутствию свободных корнеаци-тов и кератиноцитов 4,8±2,8; эритроцитарных клеточных структур 17±8,7 с высокой степенью достоверности результата. При осуществлении бактериологического анализа микрофлоры участка поражения отмечали разнообразие бактерий, представленных видами Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Streptococcus pyogenes и Streptococcus intermedius. Наивысший показатель выделенных микроорганизмов среди исследуемого видового спектра бактериальной флоры отмечен при определении Streptococcus intermedius - 1,3±0,05, Staphylococcus aureus -0,8±0,05, Streptococcus pyogenes - 0,5±0,36, что может иметь важное диагностическое значение при выборе методов терапевтического воздействия в отношение штаммов микроорганизмов. Считаем, что использование данных способов диагностики может послужить немаловажным критерием при назначении лечения препаратами различных групп, в том числе комплексных, способных воздействовать, как на патогенную, условно-патогенную микрофлору, так и на возбудителей Cheyletidae spp. и Trichodectes spp.

Список литературы:

1. Андрос, Н. О. Применение местного антибактериального средства при инфицированном повреждении кожи у кошки (клинический случай) / Н. О. Андрос // Ветеринария Северного Кавказа. - 2022. - № 5. - 154 с.

2. Барсуков, Н. П. Цитология, гистология, эмбриология : учебное пособие для вузов / Н. П. Барсуков. - Санкт-Петербург : Лань, 2022. - 268 с.

3. ГОСТ 26670-91. Методы культивирования микроорганизмов. - Москва : Стандартинформ, 1993. - 5 с.

4. ГОСТ Р 52815-2007. Методы выявления и определения количества коагулазоположительных стафилококков и Staphylococcus aureus. - Москва : Стандартинформ, 2009. - 5 с.

5. Зубенко, А. А. Чувствительность бактериальной микрофлоры к новым азотсодержащим гетероциклическим соединениям // А. А. Зубенко, А. А. Фетисов, А. Е. Святогорова // Ветеринария Северного Кавказа. -2022. - № 5. - 154 с.

6. Латыпов, Д. Г. Паразитарные болезни кроликов : учебное пособие для вузов / Д. Г. Латыпов, Р. Р. Тимербаева, Е. Г.Кириллов. - Санкт-Петербург : Лань, 2021.- 108 с.

7. Латыпов, Д. Г. Паразитарные болезни плотоядных животных : учебное пособие для вузов / Д. Г. Латыпов, Р. Р. Тимербаева, Е. Г. Кириллов. -Санкт-Петербург : Лань, 2022.- 208 с.

8. Медведева, М. А. Клиническая ветеринарная лабораторная диагностика. Справочник для ветеринарных врачей / М. А. Медведева. - Москва : Аквариум, 2020. - 416 с.

9. Фирсов, Г. М. Общая ветеринарная иммунология: учебное пособие / Г. М. Фирсов. - Волгоград: ФГБОУ ВО Волгоградский ГАУ, 2021. - 128 с.

10. Фомина, Л. Л. Общий клинический анализ крови у животных. Морфология и функция клеток. Патологические изменения морфологии клеток крови / Л. Л. Фомина, Ю. Л. Ошуркова. - Санкт-Петербург: «Лань», 2017. - 122 с.

Резюме. Авторами впервые изучено влияние арахноэнтомозов на организм лабораторных животных: мышь альбинос (Mus albus officinarum), кролик европейский (Oryctolagus-cuniculus), крыса лабораторная (Rattus norvegicus domestica). Указана важность использования инновационных диагностических способов конкретно в паразитологии, изучение принципов развития возбудителя, контроля заболеваемости на всех этапах его взаимодействия с организмом, выделяются основные особенности членистоногих данной группы. Обозначена цель работы, подразумевающая определение влияния ассоциативного проявления арахноэнтомозов на примере Cheyletiella spp. и Trichodectes spp. на цитологические показатели с учетом инокуляторного их воздействия. В исследованиях использовались лабораторно-диагностические методы, включающие идентификацию возбудителей кожных паразитов, цитологическое исследование экссудативного выпота с последующей фиксацией и окрашиванием полученных мазков-отпечатков по Паппенгейму. Определяли видовое разнообразие бактерий и собственно вторичную причину воспалительной реакции методом рутинных посевов с изучением видового разнообразия с применением тест-систем Microgen Strep-ID; Bacillus-ID Staph-ID. Установили, что цитологические изменения, обнаруживаемые при исследовании кожного соскоба у зараженных животных, в отличие от показателей клинически здоровых отличались наличием тучных клеток, нитей хроматина, нейтрофилов, лимфоцитов, эритроцитов. Найденное видовое разнообразие микрофлоры было представлено бактериями Bacillus cereus; Staphylococcus aureus; Staphylococcus epidermidis; Streptococcus pyogenes; Streptococcus intermedius в разном соотношении среди исследуемых видов животных. Авторами отмечена важность использования данных способов диагностики, что является немаловажным критериям при назначении лечения препаратами разных групп, в том числе комбинированных, способных воздействовать, как на патогенную, условно-патогенную микрофлору, так и на возбудителей Cheyletidae spp. и Trichodectes spp.

Ключевые слова: арахноэнтомозы, лабораторные животные, мышь альбинос, кролик европейский, крыса лабораторная, кожный соскоб, ассоциативное течение, цитологическое исследование, микрофлора, бактерии.

Сведения об авторах:

Миронова Анна Анатольевна, доктор ветеринарных наук, главный научный сотрудник Северо-Кавказского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «Федеральный Ростовский аграрный научный центр»; 346421, Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0.

Миронова Людмила Павловна, доктор ветеринарных наук, профессор, главный научный сотрудник Северо-Кавказского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «Федеральный Ростовский аграрный научный центр»; 346421, Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0.

Фетисов Леонид Николаевич, кандидат ветеринарных наук, ведущий научный сотрудник творческого коллектива по химическому синтезу новых лекарственных соединений Северо-Кавказского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «Федеральный Ростовский аграрный научный центр»; 346421, Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0; тел.: 8-908-1978224; e-mail: fetisoff.leonid2018@yandex.ru.

Ответственный за переписку с редакцией: Марченко Александр Петрович, младший научный сотрудник Северо-Кавказского зонального научно-исследовательского ветеринарного института - филиала ФГБНУ «Федеральный Ростовский аграрный научный центр»; 346421, 28 Ростовская область, г. Новочеркасск, Ростовское шоссе, 0; тел.: 8-961-6944547, e-mail: marchenko.alex94@yandex.ru.

 

2011 © Ветеринария Кубани Разработка сайта - Интернет-Имидж