 |
  |
|||
 |
 |
|||
|---|---|---|---|---|
|
Контроль содержания антибиотиков тетрациклиновой группы в продуктах питания на территории Российской ФедерацииУДК 619:614.31:637]615.334(470+571) Шубина Е.Г., ГруДев А.И., Другова О.П., Белоусов В.И. Федеральное государственное бюджетное учреждение Введение. Среди контаминантов продовольственного сырья и пищевых продуктов важное место занимают остатки антимикробных ветеринарных препаратов, используемых для лечения и профилактики инфекционных заболеваний животных и птицы, в том числе антибиотики тетрациклиновой группы.
Тетрациклины представляют собой группу антибактериальных препаратов, часто используемых из-за своего широкого спектра действия, а также их низкой стоимости по сравнению с другими антибиотиками. В настоящее время эта группа включает более 20 соединений, однако, наиболее распространенными в ветеринарной медицине являются тетрациклин, хлортетрациклин, окситетрациклин и доксициклин [10, 11].
Помимо терапевтических целей тетрациклины иногда добавляют в корм для скота в субтерапевтических дозах в качестве стимуляторов роста для выращивания свиней, птицы и аквакультуры [11].
В середине XX века активно изучалось и практиковалось применение антибиотиков в качестве консервантов продуктов питания. Исследователи отмечали, что антибиотики тетрациклинового ряда предотвращают порчу мясных продуктов, а хлортетрациклин является превосходным консервантом для рыбы [8]. В настоящее время во многих странах эта практика запрещена, но недобросовестные производители могут добавлять тетрациклины и другие антибиотики в пищевую продукцию для продления её срока годности и обеспечения её микробиологической безопасности.
Бесконтрольное использование антибиотиков тетрациклиновой группы несёт в себе много рисков для здоровья человека и окружающей среды. Наиболее значимым из них является возникновение устойчивости штаммов микроорганизмов к этим антибиотикам [14], что в будущем делает лечение этими препаратами бесполезным, гены устойчивости к антибиотикам и мобильные молекулы ДНК, появившиеся в результате злоупотребления антибиотиками, следует рассматривать как ксеногенные загрязнители, которые реплицируются, а не разлагаются при попадании в окружающую среду [11]. Кроме этого, тетрациклины имеют побочные эффекты и противопоказания. Например, при лечении этими препаратами у некоторых пациентов возникают нежелательные реакции со стороны различных систем органов: тошнота, рвота, диарея, головокружение, вагинальный кандидоз, токсическое поражение печени (высокие дозы тетрациклинов, особенно у беременных и пациентов с ранее существовавшим заболеванием печени, могут нарушать функцию печени и приводить к некрозу печени), токсическое поражение почек (хотя тетрациклины не являются напрямую нефротоксичными, но они могут усугубить существующую почечную дисфункцию), тетрациклины, особенно демеклоциклин, могут вызывать повышенную чувствительность кожи к ультрафиолетовому излучению. Тетрациклины также противопоказаны беременным женщинам, так как вызывают аномалии развития зубов и костей у плода [12].
В связи с вышеизложенным, необходим строгий контроль за содержанием антибиотиков тетрациклиновой группы.
ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория» в рамках мониторинговых исследований и государственного задания ежегодно осуществляет контроль продуктов животного происхождения и кормов на наличие антибиотиков тетрациклинового ряда с использованием наборов для иммуноферментного анализа и метод ВЭЖХ с флуоресцентным, УФ- и масс-спектрометрическими детекторами (пределы обнаружения составляют 0,1-1 мкг/г), а также совершенствует методы выявления в пищевых продуктах указанных антибиотиков.
В своей работе мы проанализировали международное законодательство по остаткам антибиотиков в пищевых продуктах, испытали различные методы пробоподготовки для эффективного выделения остатков антибиотиков из мяса, молока, рыбы, мёда и усовершенствовали методику анализа.
Результаты исследований и их обсуждение. В странах Таможенного союза содержание антибиотиков тетрациклиновой группы в пищевой продукции регламентировано тремя основными документами: ТР ТС 021/2011 Технический регламент Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» [4], ТР ТС 033/2013 Технический регламент Таможенного союза «О безопасности молока и молочной продукции» [7] и ТР ТС 034/2013 Технический регламент Таможенного союза «О безопасности мяса и мясной продукции» [5]. Глобальным ориентиром для потребителей, производителей и переработчиков пищевых продуктов является Кодекс Алиментариус [6]. В Европейском союзе существуют свои нормы Содержания Антибиотиков в продуктах питания, зафиксированные в Постановление Европейской комиссии № 37/2010. По фармакологически активным веществам и их классификации в отношении максимальных пределов остатков в пищевых продуктах животного происхождения [9, 13]. В таблице 1 представлены требования различных нормативных документов по содержанию четырех наиболее распространенных антибиотиков тетрациклиновой группы в пищевой продукции для некоторых матриц. Таблица 1 Требования различных нормативных документов по содержанию антибиотиков тетрациклиновой группы в пищевой продукции
ТР ТС 021/2011, ТР ТС 033/2013 и Кодекс Алиментариус регламентируют содержание нескольких антибиотиков тетрациклиновой группы в целом, тогда как Постановление Европейской комиссии рассматривает каждый антибиотик по отдельности.
Как видно из таблицы 1 на территории Таможенного Союза установлены жесткие требования содержания антибиотиков тетрациклиновой группы, в 10-60 раз ниже, чем в Европейском союзе. Для надзора за соблюдением этих требований в России созданы федеральные и региональные лаборатории, которые оснащены современными приборами, способными выявлять остатки тетрациклинов в пределах 0,1-1 мкг/г.
Существуют различные методики определения антибиотиков тетрациклиновой группы. В лабораторной практики они делятся на две части: скрининговые методы и подтверждающие методы.
Применяется экспресс-тест «Tetra Star», основанный на анализе специфического рецептора тетрациклиновой группы, имеет высокую чувствительность (2 до 50 мкг/кг). Микробиологический тест «Copan Test» включает споры Bacillus stearothermophilus calidolactis, с высокой чувствительностью определяет антибиотики группы в-лактамов, тетрациклинов, аминогликозидов, макролидов и других антибиотиков. Тест, включающий микроорганизмы вида Streptocoecus thermophilus предложен для определения пенициллина, стрептомицина и тетрациклина в молоке [2]. Пределы обнаружения составляют 0,01 МЕ/мл, 10 мкг/мл и 1 мкг/мл, соответственно. Антибиотики тетрациклинового и хинолонового ряда могут также выявляться люминесцентным методом. В ряде исследований для снижения пределов обнаружения, повышения селективности, либо уменьшения времени проведения анализа применяется твердофазная спектрофлуориметрия. Методика предусматривает определение тетрациклина в курином мясе непосредственно в фазе сорбента по люминесценции его комплекса с ионом Eu (III) [1]. Разработаны методики электрохимического определения антибиотиков тетрациклинового ряда (окситетрациклина, мета-циклина и тетрациклина) в молоке с использованием амперометрического титрования и ионометрии. К скрининговым относятся также методы иммуноферментного анализа (ИФА). Эти методы основаны на специфической реакции антиген-антитело. Анализ осуществляется с помощью тест-наборов различных производителей. Эти методы отличаются производительностью, высокой чувствительностью и сравнительно невысокой стоимостью, но в редких случаях могут показывать ложные результаты. В настоящее время метод ИФА развивается, появляются более надежные тест-системы, расширяется область их применения. Также на основе этого метода создана технология микрочипов, используемая в приборах Randox, где повышена селективность и точность анализов. Пределы обнаружения антибиотиков указанными методами составляют 0,01-0,05 мкг/мл.
Однако по действующим российским и международным нормам положительные результаты скрининговых анализов должны быть обязательно проверены подтверждающими методами, к ним относится метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором (ВЭЖХ МС/МС). На территории Российской Федерации действует один стандарт на определение остаточных содержаний антибиотиков тетрациклиновой группы в пищевой продукции подтверждающим методом - ГОСТ 31694-2012 «Продукты пищевые, продовольственное сырье. Метод определения остаточного содержания антибиотиков тетрациклиновой группы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором» [3]. Этот метод рассчитан на определение четырех основных антибиотиков тетрациклиновой группы в объектах животного происхождения. Помимо этой универсальной методики в России группами исследователей создаются более быстрые и экономичные методики пробоподготовки к анализу антибиотиков тетрациклиновой группы методом ВЭЖХ МС/МС [1, 2, 7].
Развитие и внедрение в практику методик ВЭЖХ МС/МС идет в сторону расширения области исследуемых матриц и аналитов, так как в отдельных случаях антибиотики могут попадать в растительное сырье и объекты окружающей среды, кроме того с развитием ветеринарии и медицины помимо четырех основных тетрациклинов могут применяться и другие антибиотики этой группы. Для выделения антибиотиков из анализируемых образцов применяют различные методы экстракции с целью повышения пределов обнаружения остатков антибиотиков (органические растворители, твердофазная экстракция). Пределы обнаружения антибиотиков в пищевых продуктах приборным методом составляют 1-5 мкг/г.
Нами, в 2018 году изучена сорбция тетрациклинов на сорбентах различной природы и концентрирование этих соединений для определения в матрицах методом ВЭЖХ МС/МС. Разработаны способы пробоподготовки для извлечения тетрациклинов из мяса, молока, рыбы и меда (водных и водно-органических растворов). Наилучшие результаты были получены при использовании сверхшитого полистирола. Уровень выделения тетрациклинов при этом составил 92-99,9%. Выбраны также условия разделения окситетрациклина, хлортетрацик-лина и доксицилина на колонках со сшитым полистиролом и смесью ацетонитрила и фосфорной кислоты.
Повсеместному внедрения в ветеринарную практику методов ВЭЖХ МС/МС мешает высокая цена на оборудование, наличие квалифицированных кадров, сложности технического обслуживания. Такие приборы в достаточных количествах могут позволить себе только крупные испытательные лаборатории. Продукты животного происхождения на остаточное содержание антибиотиков контролируются государственными ветеринарными лабораториями в рамках государственных заданий. Всего было проведено 234 256 (2017 год) и 237 223 (2018 год) лабораторных исследований образцов от 14 видов продукции (мясо всех видов животных, рыба и рыбопродукты, нерыбные объекты промысла, молоко и молочные продукты, яйца и продукты их переработки, мёд, корма).
В структуре исследуемых показателей при выполнении плана мониторинга безопасности пищевых продуктов и кормов на антибиотики приходилось 8,9% (рисунок 1).
На наличие тетрациклинов в 2017 году исследовано 27 289 проб пищевых продуктов и в 633 (2,3%) были выявлены остатки антибиотиков тетрациклиновой группы; в 2018 году исследовано 49 223 пробы и выявлено 444 (1,5%) положительных проб. Анализ показал, что из всех положительных проб антибиотики тетрациклинового ряда занимают 12%.
Рис. 1. Структура исследуемых показателей безопасности при выполнении плана мониторинга безопасности пищевых продуктов и кормов Нами в 2017, 2018 и первой половине 2019 года были проведены исследования образцов пищевых продуктов на наличие антибиотиков тетрациклиновой группы подтверждающим методом (ВЭЖХ МС/МС) с целью подтверждения результатов, полученных скрининговыми методами. Результаты приведены на рисунке 2 и зарегистрированы в электронной системе «Веста».
Рис. 2. Общий объем исследований пищевых продуктов на содержание антибиотиков тетрациклиновой группы подтверждающим методом, зарегистрированных в системе «Веста» Из рисунка 2 видно, что объем исследований в 2018 году существенно вырос, а в 2019 году планируется превышение объема исследований 2018 года. Этому способствует рост уровня технического оснащения лабораторий и профессиональный рост сотрудников.
Сравнительный анализ процента положительных проб за 2017 и 2018 годы продемонстрировал снижение выявляемости антибиотиков в исследованных пробах пищевых продуктов, что свидетельствует о более эффективном контроле ветеринарных специалистов за применением лекарственных средств при выращивании животных, убое животных и использования продуктов животного происхождения после их лечения.
Заключение. Выявление остаточного содержания антибактериальных препаратов, в частности антибиотиков тетрациклиновой группы, в продуктах питания - важная задача государственной ветеринарной службы. В России она решается на федеральном и региональном уровнях в рамках выполнения ежегодных программ по мониторингу безопасности пищевых продуктов и кормов в федеральных государственных бюджетных учреждениях Россельхознадзора и региональных государственных ветеринарных лабораториях субъектов Российской Федерации. Лаборатории Россельхознадзора постоянно оснащаются современным оборудованием и проводят научно-исследовательские работы по разработке новых более эффективных методик определения остатков лекарственных средств в продуктах животного происхождения.
Список литературы:
Резюме. Среди контаминантов продовольственного сырья и пищевых продуктов важное место занимают остатки антимикробных ветеринарных препаратов, используемых для лечения и профилактики инфекционных заболеваний животных и птицы, в том числе антибиотики тетрациклиновой группы. В статье рассмотрена проблема обнаружения антибиотиков тетрациклиновой группы на территории Российской Федерации, проанализировано влияние этих веществ на здоровье человека, приведен сравнительный анализ максимально допустимых концентраций тетрациклинов в пищевых продуктах в странах Таможенного Союза и Евросоюза, рассмотрены существующие лабораторные методы определения концентрации этих веществ в пищевых продуктах, проведены исследования различных видов пищевых продуктов животного происхождения на наличие антибиотиков. Авторами также проанализировано международное законодательство по остаткам антибиотиков в пищевых продуктах, испытаны различные методы пробоподго-товки для эффективного выделения остатков антибиотиков из мяса, молока, рыбы, мёда и усовершенствована методика анализа. На наличие тетрациклинов в 2017-2018 годах исследовано 76 512 проб пищевых продуктов, и в 1 077 (1,4%) были выявлены остатки антибиотиков тетрациклиновой группы. Анализ показал, что из всех положительных проб антибиотики тетрациклинового ряда занимают 12%. Выявление остаточного содержания антибактериальных препаратов, в частности антибиотиков тетрациклиновой группы, в продуктах питания - важная задача государственной ветеринарной службы. Лаборатории Россельхознадзора постоянно оснащаются современным оборудованием и проводят научно-исследовательские работы по разработке новых более эффективных методик определения остатков лекарственных средств в продуктах животного происхождения.
Ключевые слова: антибиотики, остатки антибиотиков тетрациклиновой группы, продовольственное сырье, пищевые продукты, мясо, молоко, рыба, мёд, лабораторный контроль, проба, положительные результаты.
Сведения об авторах:
Шубина Елена Геннадьевна, кандидат химических наук, инженер-химик Московской испытательной лаборатории ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, 23; e-mail: ktyfvbn@mail.ru.
Грудев Артём Игоревич, исполняющий обязанности заместителя руководителя лаборатории - заведующий химико-токсикологическим отделом Московской испытательной лаборатории ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, 23; e-mail: grutem@yandex.ru.
Другова Оксана Петровна, руководитель Московской испытательной лаборатории ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, 23; е-mail: drugova-cnmvl@yandex.ru.
Белоусов Василий Иванович, доктор ветеринарных наук, профессор, главный научный сотрудник ФГБУ «Центральная научно-методическая ветеринарная лаборатория»; 111622, г. Москва, ул. Оранжерейная, 23; e-mail: vibelousov51@mail.ru.
Сатюкова Людмила Павловна, кандидат ветеринарных наук, доцент ФГБОУ ВО «Московский государственный университет пищевых производств»; 125080, г. Москва, Волоколамское шоссе, 11.
Ответственный за переписку с редакцией: Черных Олег Юрьевич, доктор ветеринарных наук, доцент, профессор кафедры микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВО «Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина»; 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13; тел.: 8-918-4956659; e-mail: gukkvl50@kubanvet.ru.
|
|
| 2011 © Ветеринария Кубани | Разработка сайта - Интернет-Имидж | |
|---|---|---|