Изучение вирулентных свойств выделенных изолятов pseudomonas aeruginosa

Пруцаков С.В., Болоцкий И.А., Семенцов В.И.,
Васильев А.К. ГНУ Краснодарский НИВИ

Значительная инфицированность животных и птиц во всех регионах России, а также многочисленные публикации оте­чественных и зарубежных исследователей, которые отмеча­ют, что рациональная терапия болезней, вызываемых патогенными культурами синегнойной палочки, очень затруднительна и представля­ет на современном этапе актуальную проблему.

Поэтому, всестороннее изучение биологических свойств возбу­дителя, в том числе его вирулентности, помогает правильно диагнос­тировать заболевание и способствует ликвидации эпизоотий псевдомоноза.

Способность микроорганизма вызывать заболевание называет­ся патогенностью. Эта способность возбудителя зависит от вида мик­роорганизма и от макроорганизма и может быть различной в разных условиях. Возбудитель одного и того же вида может быть в различных отношениях со своей жертвой - макроорганизмом. Микроорганизм может вызвать инапарантное заболевание (без клинических призна­ков болезни), субклиническую болезнь (без клинических явлений, но с ограниченными расстройствами) и может быть причиной тяжелой и даже смертельной болезни, с клиническими признаками.

Вирулентность выделенных изолятов P. aeruginosa определяли на беспородных белых мышах весом 18 - 20 грамм. Для этой цели отобрали 105 культур P. aeruginosa 8 серогрупп, наиболее часто вы­деляемых от животных, кормов и объектов внешней среды. Каждую культуру выращивали на чашках Петри, делали смывы стерильным физиологическим раствором, доводили концентрацию до 2 милли­ардов микробных тел в см3 и методом последовательных разведе­ний готовили рабочие разведения 500; 250; 125; 62,5; 31,5; 15,63 миллионов микробных тел в 1 см3. Каждую дозу каждой серогруппы вводили 5 мышам внутрибрюшинно и вели наблюдения в течение 5 суток.

В случае их гибели в течении 18 - 24 часов от дозы 125 мил­лионов микробных тел - культуру считали высоковирулентной. При гибели мышей от дозы 250 миллионов микробных тел считали виру­лентной, а при гибели мышей от 500 миллионов микробных тел - сла­бовирулентной. Если же гибель мышей от дозы 500 миллионов мик­робных тел не наступала - культуру считали авирулентной. Результаты данного опыта сведены в таблицу 1.

Таблица 1. Степень вирулентности изолятов Pseudomonas aeruginosa, выделенных из разных объектов

Из таблицы 1 видно, что не все изоляты P. aeruginosa облада­ли одинаковой вирулентностью, больше того, 9 из 105 (8,6%) вообще были авирулентны. По степени вирулентности отмечено, что высоко­вирулентных изолятов, т. е. вызывающих гибель белых мышей в дозе 125 миллионов микробных тел, было 54,3%, вирулентных - 21% и слабовирулентных - 16,1%. Преобладали изоляты с высокой вирулен­тностью. Если проанализировать зависит ли вирулентность изолята от объекта его выделения, то мы видим, что наибольшее количест­во вирулентных изолятов получено из патологического материала от свиней - 95,9%, на втором месте изоляты полученные из патологи­ческого материала от крупного рогатого скота - 94,4%. От этих же видов животных больше всего выделено высоковирулентных культур 63,2 и 63,9% соответственно. Более низкий процент выделения ви­рулентных изолятов получен из кормов (76,9%) и объектов внешней среды (71,4%). Из этих же объектов выделяли в большем количестве слабовирулентных культур (28,6 - 38,1%) и совсем низкий процент высоковирулентных (14,2 - 15,9%).

Замедленные процессы обмена и размножения у микроорга­низмов вне животных объектов, снижение пассажей через организ­мы восприимчивых животных, снижаеют степень вирулентности и количество вирулентных изолятов P. aeruginosa.

Для каждой из взятых культур была своя LD50. Причем, разброс был значительный. Однако, данные результаты также убедительно доказали, что изоляты, выделенные от свиней, достоверно были более вирулентные, чем выделенные от крупного рогатого скота.

При сопоставлении данных по серологическим исследованиям и вирулентностью не отмечено четкой корреляции между серогрупповой принадлежностью и уровнем вирулентности выделенных изолятов.

Изучением изменения вирулентности культур P. aeruginosa, вы­ращенных на различных средах (бульон Хоттингера, ЦПХ, среда с аце-тамидом, Кинг А и Б) не было отмечено снижения исходной вирулент­ности. Кроме того не отмечено снижения вирулентности у культур при длительном хранении на мясо - пептоном агаре и бульоне в течении года. При хранении же в замороженном физиологическом растворе в морозилке бытового холодильника исходная вирулентность в течение года снижалась в два раза.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изоляты P. aeruginosa обладали не одинаковой вирулентностью, больше того 9 из 105 (8,6%) вообще были авирулентны. По степени вирулентности отмечено, что высоковирулентных изолятов, т. е. вызы­вающих гибель белых мышей от 125 миллионов микробных тел, было 54,3%, вирулентных - 21% и слабовирулентных - 16,1%.

Замедленные процессы обмена и размножения у микроорга­низмов вне животных объектов, снижение пассажей через организ­мы восприимчивых животных, снижают степень вирулентности и ко­личество вирулентных изолятов P. aeruginosa.

Изоляты, выделенные от свиней достоверно были более виру­лентные, чем выделенные от крупного рогатого скота.

При хранении в замороженном физиологическом растворе ис­ходная вирулентность в течение года снижалась в два раза.

Список литературы

1. Больных В.Т. Псевдомонозы животных и их профилактика / В.Т Больных, Е.А. Кирьянов, Н.В. Больных// Под ред. Е.А. Кирьянова. - Владивосток. - Дальневосточное книжн. издат. - 1987. - С. 37-43.
2. Псевдомоноз свиней в Краснодарском крае./ ПруцаковС.В., Васильев А.К., Болоцкий И.А.Семенцов В.И. Васильев В.Ф., Хурай Р.Я., Ермакова Т.В. Молчан С.К. // Ветеринария. - 2002. - N° 12. - С.12-14.
3. Инфекционные болезни свиней: учеб. Пособие /сост. И.А. Болоцкий. [и др.] - Ростов-на Дону. - "Феникс", 2007.-С. 188-195. (Высшее образование)
4. Пруцаков С.В. Болоцкий И.А.Семенцов В.И.Васильев А.К., Вопросы эпизоотологии псевдомоноза сельскохозяйственных животных /"Ветери­нария Кубани" N° 2, 2010, с. 19 - 20/
5. Годовые отчеты лаборатории эпизоотоло­гии Краснодарского НИВИ за 2004-2009 гг.

Реферат

В статье приводятся анализ данных по степе­ни вирулентности выделенных культур P. aeruginosa. Сообщается об изменениях вирулентности культур P. aeruginosa, выращенных на различных средах.

Ключевые слова: эпизоотология, псевдомоноз, патогенность, вирулентность, биологические свойства, свиньи, корма.

UDC 619:570.841.12

STUDYING VIRULENCE OF PSEUDOMONAS AERUGINOSA ISOLATES

Prutsakov S.V., Bolotskiy I.A., Sementsov V.I., Vasilyev A.K.

Summary

An analysis of data on extent of virulence of isolated cultures of P. aeruginosa are presented in article. It is reported on the changes of the virulence of P. aeruginosa cultures, grown up on various environments.

Key words: epizootology, pseudomonosis, рathogenicity, virulence, biological properties, pigs, forage.

About the authors

Semencov Vladimir I., Ph. D. in Veterinary Medicine, chief staff scientist of the laboratory of epizootology of Krasnodar Scientific-Research Veterinary Institute;

Prutsakov Sergey V., Ph. D. in Veterinary Medicine, senior staff scientist of the laboratory of epizootology of Krasnodar Scientific-Research Veterinary Institute;

Vasilyev Alexander K., Ph. D. in Veterinary Medicine, senior staff scientist of the laboratory of epizootology of Krasnodar Scientific-Research Veterinary Institute;

Responsible for correspondence with the editorial board:

Bolotskiy Ivan A., D. Sc. in Veterinary Medicine, head of the laboratory of epizootology of Krasnodar Scientific-Research Veterinary Institute; 1st Line st, Krasnodar, Russia, 350004; phone: +7 (861) 221-54-77; e-mail: neovet2005@mail.ru.

Сведения об авторах

Семенцов Владимир Иванович, к.в.н., ведущий научный сотруд­ник лаборатории эпизоотологии КНИВИ, тел. 8 (861) 221-54-77;

Пруцаков Сергей Владимирович, к.в.н., старший научный со­трудник лаборатории эпизоотологии КНИВИ, тел. 8 (861) 221-54-77;

Васильев Александр Климентьевич, к.в.н., старший научный со­трудник лаборатории эпизоотологии КНИВИ, тел. 8 (861) 221-54-77

Ответственный за переписку с редакцией: Болоцкий Иван Александрович, зав. лабораторией эпизоотологии Краснодарского НИВИ, док. вет наук; 350004, г. Краснодар, ул. 1-я Линия, ГНУ Крас­нодарский НИВИ, 8-861-221-54-77, e-mail: neovet2005@mail.ru